spettrometria di massa
spettrometria di massa
Metodologia chimica analitica per identificare sostanze sconosciute. Il composto da analizzare viene prima separato nelle sue componenti tramite cromatografia, che separa anche miscele complesse, e successivamente introdotto nello spettrometro. Qui il composto viene ionizzato, cioè trattato in modo da produrre ioni molecolari con carica unitaria positiva, per es., con una metodologia chiamata MALDI (Matrix-assisted laser ionization). Gli ioni verranno separati e identificati da un analizzatore, in funzione del rapporto tra massa e carica. Nello spettrometro deve essere eliminato il gas atmosferico che potrebbe interferire con il comportamento degli ioni, quindi lo strumento opera sotto vuoto (10÷4mmHg). Gli ioni che hanno superato l’analizzatore sono provvisti di una carica estremamente debole: tale carica viene potenziata da un rivelatore che amplifica la debolissima corrente e trasmette i dati a un computer che, a sua volta, li interpreta attraverso software dedicati e produce un istogramma in cui sono riprodotti i vari picchi di abbondanza dello ione, nell’asse y, in funzione della sua massa, nell’asse x. Questo spettro può essere confrontato con un archivio di spettri per identificare la molecola esaminata. In casi rari non è possibile identificare in maniera univoca la sostanza. La farmacocinetica e la proteomica utilizzano la spettrometria di massa per caratterizzare proteine in soluzioni complesse (urina, sangue, estratti cellulari) in quanto questa tecnica permette un’identificazione precisa di singoli componenti anche se presenti a bassa concentrazione e in mescolanza con un elevato numero di molecole diverse. In questo caso la miscela di proteine o la loro digestione enzimatica è frazionata utilizzando elettroforesi su gel a due dimensioni o cromatografia in fase liquida. I peptidi derivati dalla digestione della singola proteina possono essere identificati per confronto con una banca dati di masse predette per peptidi derivati dalla digestione enzimatica di proteine a sequenza nota.